Le dernier tableau de la paroi de gauche, commencé par l’artiste siennois Alessandro Casolani et terminé par son fils Ilario dans la seconde moitié du XVIe siècle, représente l’annonciation de la naissance de Jésus à la Vierge Marie. Celle-ci, à notre droite, est surprise par la visite de l’Archange Gabriel qui la salut en lui tendant un lys blanc, signe de pureté. Il indique la colombe de l’Esprit saint qui apparait dans les nuages avec la main droite. Par terre, au premier plan se trouve un panier de couture, et à côté de la jeune femme un livre ouvert et un sablier posés sur une table.  Ce dernier indique que le dessein de Dieu ne se réalise pas dans une dimension abstraite, mais dans le temps qui passe.  Dans un contexte du quotidien il se passe quelque chose d’extraordinaire : Marie accepte d’accomplir la volonté de Dieu et de devenir la Mère de Jésus. Cependant, la jeune fille ne cache pas sa peur et sa surprise d’avoir été choisie par le Seigneur. Avec la main droite sur la poitrine, elle semble dire : “moi vraiment?”.
Une sorte de fenêtre où se trouvait précédemment une autre peinture, se détache au milieu du tableau.