La question de l’Immaculée Conception est chère au cœur de saint Augustin, qui plusieurs fois a soutenu la maternité physique et divine de Marie, outre sa virginité. Le tableau qui occupe le troisième autel de la nef, à gauche, est dédié à ce thème. Dans l’œuvre peinte en 1671 par le peintre baroque Carlo Maratta, la Madone est représentée selon l’iconographie traditionnelle de l’Immaculée Conception : Marie porte un vêtement blanc, emblème de pureté absolue, et sa tête est entourée d’une couronne de douze étoiles qui symbolisent les douze tribus d’Israël. Ses pieds s’appuient sur un globe, la Terre, attaquée par le serpent mais défendue par la Vierge. Sur les côtés du tableau, apparaissent : saint François de Sales et Tommaso da Villanova, l’un des Saints augustiniens les plus célèbres pour sa dévotion à la Madone. Un autel est dédié à ce saint ; il est décoré de deux peintures de Raffaello Vanni, réalisées en 1664.